總大腸菌群濾膜法membrane filter technique for total coliforms ，總大腸菌群用微生物限度薄膜過濾檢測儀如何檢測

　　總大腸菌群濾膜法是指用孔徑為0.45pm的微孔濾膜過濾水樣,將濾膜貼在添加乳糖的選撣性培養基上37C培養24h,能形成特征性菌落的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌以檢測水中總大腸菌群的方法。

　　檢驗步驟

　　1、準備工作

　　濾膜滅菌:將濾膜放入燒杯中,加入蒸餾水,置于佛水浴中煮佛滅菌3次,每次15 min。前兩次煮沸后需更換水洗滌2次~3次,以除去殘留溶劑。濾器滅菌;用點燃的酒精棉球火焰滅菌。也可用蒸汽滅菌器103. 43 kPa (121C,15 Ib)高壓滅菌20 min.

　　2、過濾水樣

　　用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上.固定好濾器,將100 ml水樣(如水樣含菌數較多，可踐少過濾水樣量，或將水樣稀釋)注人濾器中,打開濾器閥門,在-5.07X10' Pa(負0.5大氣壓)下抽濾。

　　3、培養

　　水樣濾完后,再抽氣約5s.關上濾器閥門,取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分.移放在品晶紅亞硫酸鈉培養基上,濾膜截留細菌面向上,濾膜應與培養基完全貼緊,兩者間不得留有氣泡,然后將平皿倒置.放入37C恒溫箱內培養24 h士2 h.

　　4、結果觀察與報告

　　挑取符合 下列特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢：

　　紫紅色,具有金屬光澤的菌落:

　　深紅色.不帶或略帶金屬光澤的菌落;

　　淡紅色.中心色較深的菌落。

　　凡革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌.再接種乳糖蛋白胨培養液,于37仁培養24h,有產酸產氣者,則判定為總大腸菌群陽性。

　　按式(1)計算濾膜 上生長的總大腸菌群數,以每100 mI.水樣中的總大腸菌群數(CFU/100 mL)報告之。